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微生物實驗室純培養(yǎng)在生物技術(shù)中是一個重要的操作實驗，課題涉及內(nèi)容多、范圍廣，實驗難度很大。為了使學(xué)生更好地了解實驗中的許多工作，包括儀器使用、菌液稀釋、菌株移植、接種等，都要在無菌的或不被污染的條件下進(jìn)行，才能保證做到純粹培養(yǎng)成功，筆者結(jié)合教學(xué)實際談?wù)剬Ρ菊n題的教學(xué)設(shè)計。
一、教學(xué)目標(biāo)確立
依據(jù)課程內(nèi)容要求，確立本課題教學(xué)目標(biāo)見表1。
表1
二、教學(xué)實施設(shè)計
1.制訂實驗計劃
依據(jù)課程內(nèi)容要求，確立本課題教學(xué)安排見表2。
表2
2.純化大腸桿菌的原理
微生物的純培養(yǎng)，選用平板劃線法或稀釋涂布平板法，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上操作，經(jīng)培養(yǎng)后可分離得到單個細(xì)胞繁殖而來的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，即菌落。
3.準(zhǔn)備實驗材料
本課題所用材料、儀器及藥品見表3。
表3
實驗材料 大腸桿菌 配制系列稀釋菌液
實驗儀器和設(shè)備 培養(yǎng)皿、試管、酒精燈、試管架、移液管、膠頭滴管、接種環(huán)、涂布器、恒溫箱、無脂棉、玻璃棒、消毒棉球、超凈工作臺 培養(yǎng)皿、試管、移液管、接種環(huán)、涂布器等滅菌（已滅菌備用）
實驗藥品 牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基200ml、無菌水150ml 提前配制（滅菌備用）
4.實驗操作
（1）指導(dǎo)實驗操作。本課題實驗可按照下面實驗流程進(jìn)行操作：
超凈工作臺倒平板、接種培養(yǎng)箱純化培養(yǎng)。
（2）接種法。一般是無菌培養(yǎng)基在水浴鍋加熱融化后冷卻至50℃左右倒平板。操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行，每皿倒入15ml左右并且不要將皿蓋完全打開，冷卻后的平板要倒置。
平板劃線法（圖1）：即用接種環(huán)將菌體沾在平板培養(yǎng)基上。微生物細(xì)胞隨畫線次數(shù)的增多而減少，將微生物單個地分離，并最終形成標(biāo)準(zhǔn)的菌落。在畫線操作時應(yīng)注意：一是用接種環(huán)取菌種之前、每次畫線之前和畫線結(jié)束都要進(jìn)行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；二是畫線時不要劃破培養(yǎng)基，如果采用分段畫線法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次畫線末端開始，首尾區(qū)不能相連；三是操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行。
稀釋涂布平板法（圖2）：即先將菌液用無菌水進(jìn)行一系列梯度為（如10-1，10-2，10-3）稀釋液，用無菌玻璃涂棒將不同稀釋度的菌液均勻地涂布在平板上。聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。在涂布操作時應(yīng)注意：一是配制系列梯度稀釋液必須用無菌水配制；二是配制系列梯度稀釋液和轉(zhuǎn)移菌液以及涂布過程等必須都在酒精燈火焰旁進(jìn)行。
（3）培養(yǎng)操作。 將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基（空白）放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)18～24h后，觀察并記錄。這期間安排學(xué)生代表或?qū)嶒炐〗M長進(jìn)行定期觀察，并做好記錄，以便及時讓其他學(xué)生觀察到自己的實驗成果。
2實驗教學(xué)準(zhǔn)備工作幾項準(zhǔn)則
2.1嚴(yán)格進(jìn)行每個實驗項目的預(yù)實驗
預(yù)備實驗是保證實驗教學(xué)質(zhì)量的前提，其目的是：檢驗實驗技術(shù)方法及操作規(guī)程是否準(zhǔn)確無誤，所用溶液、試劑和藥品是否合格；進(jìn)一步確定實驗所需時間，探索可能出現(xiàn)的問題并擬定解決問題的方案，根據(jù)實驗難易程度確定評分標(biāo)準(zhǔn)等[6]。另外，制片及染色技術(shù)實驗，特別是微生物的生長與培養(yǎng)實驗，常常出現(xiàn)許多意外現(xiàn)象或不理想的實驗結(jié)果。諸如，某種溶液和試劑失效，或某種微生物生長不好等等。因此，每個實驗項目都應(yīng)當(dāng)提前預(yù)做一次，確保實驗結(jié)果準(zhǔn)確、無誤，以保證實驗教學(xué)質(zhì)量。
2.2認(rèn)真做好實驗教學(xué)前期準(zhǔn)備工作
實驗教學(xué)的前期準(zhǔn)備工作，除嚴(yán)格進(jìn)行預(yù)實驗外，尚需認(rèn)真檢查顯微鏡和儀器設(shè)備、玻璃器皿及溶液、試劑等，以及實驗桌凳的完好狀態(tài)。2.2.1顯微鏡的檢查要點實驗課前認(rèn)真檢查：普通光學(xué)顯微鏡機械部分的鏡臂、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、標(biāo)本夾、粗細(xì)調(diào)節(jié)器，以及光學(xué)系統(tǒng)的目鏡、物鏡和聚光鏡的完好情況，尤其是要仔細(xì)檢查調(diào)節(jié)器的靈敏度和油鏡的清晰度。2.2.2實驗用儀器設(shè)備完整性的檢查實驗課前應(yīng)當(dāng)認(rèn)真檢查儀器設(shè)備的完整性。在實驗教學(xué)過程中最忌諱出現(xiàn)缺東少西，以及儀器設(shè)備和物品質(zhì)量不合要求的現(xiàn)象[7]。每堂實驗課所需的所有物品，都應(yīng)當(dāng)備足有余，所用儀器設(shè)備都要保持運轉(zhuǎn)良好。實驗用儀器及物品完整性檢查工作是相當(dāng)繁瑣的，工作量也很大。舉例說明，微生物學(xué)實驗課的前3個實驗項目，即光學(xué)顯微鏡的使用與革蘭氏染色法、細(xì)菌運動性及其莢膜觀察、酵母菌的死活鑒別，以及放線菌、霉菌制片與細(xì)菌計數(shù)，所用的滴瓶總計200多個，需要逐個地進(jìn)行嚴(yán)格檢查：膠頭是否漏氣，瓶中的試劑是否失效、夠用，滴芯是否能順利地取出(發(fā)現(xiàn)沉淀和結(jié)晶應(yīng)及時清洗)，標(biāo)簽變色嚴(yán)重的還要及時更換。其他儀器設(shè)備及實驗桌凳的完好狀態(tài)也都應(yīng)當(dāng)進(jìn)行認(rèn)真檢查，如逐一檢查每個實驗凳腳是否松動，并及時擰緊等。2.2.3玻璃器皿一定要洗刷干凈微生物實驗教學(xué)所用的玻璃器皿數(shù)量很大，如試管、培養(yǎng)皿和三角燒瓶及載玻片等數(shù)以千計。用來盛裝微生物培養(yǎng)基的大量試管、培養(yǎng)皿和三角燒瓶，有一丁點不干凈就會生長霉菌；有的如載玻片上黏附了香柏油，洗刷難度很大。所以，玻璃器皿的洗刷工作是十分重要而艱巨的。玻璃器皿的全部洗刷工作都是教師與同學(xué)們共同完成的。洗刷后的檢查工作采用對著陽光以流水沖洗的方式進(jìn)行，確保每一個玻璃器皿干凈明亮。其具體安排程序如下：玻璃器皿經(jīng)學(xué)生洗刷后，再由同學(xué)進(jìn)行檢查，最后由教師抽樣檢查。這樣，不僅保證了玻璃器皿的干凈度，還培養(yǎng)了學(xué)生掌握高精度清洗器皿的基本技能及嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。
3重視并完善解決實驗課堂上出現(xiàn)的問題
對于在微生物實驗教學(xué)過程中經(jīng)常出現(xiàn)的一些問題，必須認(rèn)真分析原因，并及時想辦法解決。在出現(xiàn)的問題中，有些是屬于實驗內(nèi)容及其技術(shù)方法問題，但常常碰到的是一些由于學(xué)生缺少應(yīng)有的素質(zhì)或經(jīng)驗所造成的，都應(yīng)該及時分析并適當(dāng)解決之。諸如，有的顯微鏡粗鑼旋縫隙里有許多油漬，究其原因是由于同學(xué)們的手不夠清潔所造成的；為此，便要求學(xué)生在使用顯微鏡之前，一定要洗手。再如，個別同學(xué)有時將實驗用的標(biāo)本片丟落在載物臺上，為了避免類似情況再次發(fā)生，便要求學(xué)生每次實驗結(jié)束后一定要清點一下標(biāo)本片的數(shù)量。第三，當(dāng)發(fā)現(xiàn)個別學(xué)生把臺微尺扔到放有載玻片的鍋里，為此便不再將其擺放到學(xué)生的座位上，而是現(xiàn)場把臺微尺發(fā)放給每一組同學(xué)，并講明其價格昂貴，應(yīng)當(dāng)細(xì)心使用，輕拿輕放，課后由課代表統(tǒng)一交給老師核查。第四，有的學(xué)生把雙層瓶（重層瓶）的玻璃帽和裝有結(jié)晶紫的滴蕊擰碎，為了避免類似情況再次出現(xiàn)，每次上課前都要把其逐一擦拭，并檢查每一個滴瓶的滴蕊是否松動。
中圖分類號：G647 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1674-9324（2016）38-0277-02
隨著我國高校教育科研事業(yè)的發(fā)展，為了適應(yīng)新世紀(jì)建設(shè)創(chuàng)新型國家的需要，高校建立了以團(tuán)隊為主的科技創(chuàng)新模式，成立了多個獨立于本科教學(xué)實驗的科研實驗室。微生物學(xué)是生物科學(xué)的重要分支，微生物結(jié)構(gòu)簡單、操作容易成為高新生物技術(shù)的理論和技術(shù)基石。許多微生物如大腸桿菌、酵母菌等作為研究的模式生物和分子生物學(xué)重要的載體宿主，已經(jīng)成為各個實驗室常規(guī)培養(yǎng)的微生物，因此許多高校都成立了微生物科研團(tuán)隊和科研實驗室。大量的老師，科研人員、研究生和參加大學(xué)生創(chuàng)新立項的本科生長期在一個實驗室里面進(jìn)行科學(xué)研究工作。然而，科研實驗室中存在很多危害人身安全和實驗室安全的隱患，這不得不引起我們的高度重視。
教學(xué)實驗室由于實驗本身安全性高，實驗流程固定，安全防護(hù)措施完善等原因，因此發(fā)生安全事故低，教學(xué)實驗室發(fā)生事故造成學(xué)生傷亡的事件鮮有報道。與本科教學(xué)實驗室不同，科研實驗室往往具有下面幾個特點：空間有限，實驗室儀器和試劑種類多數(shù)量大，人員多且相對固定，人員在實驗室活動時間長?？蒲袑嶒炇业哪康氖菫榱丝萍紕?chuàng)新，因此往往實驗種類多，試驗新穎，實驗本身的危險系數(shù)高。由于許多新實驗的步驟和方法來自于文獻(xiàn)，文獻(xiàn)中缺乏相應(yīng)的安全防護(hù)措施的描述，造成了實驗操作人員對于實驗安全本身危險性估計不足。另一方面由于長期待在相對固定的一個空間，對周圍環(huán)境熟悉，造成安全意識逐漸減弱；長期以來實驗室注重學(xué)生對實驗技能的掌握，忽視對實驗室安全的教育問題，也是造成安全隱患的主要原因。
近年來多起高校實驗室安全事故大多都是來自科研實驗室：2009年德國女科學(xué)家在實驗過程中被含有埃博拉病毒的注射器刺到，疑似感染埃博拉病毒；2013年04月30日南京理工大學(xué)實驗室爆炸造成1死3傷；2015年4月5日中國礦業(yè)大學(xué)實驗室發(fā)生爆燃，造成成1死4傷；2015年12月18日清華大學(xué)實驗室發(fā)生爆炸，造成1名博士后死亡。這些事故大多都是科研實驗室管理不規(guī)范造成的，因此微生物科研實驗室安全問題的探索與研究十分重要。
一、微生物科研實驗室現(xiàn)狀
微生物科研實驗室不僅是科技創(chuàng)新平臺，還是本科生畢業(yè)設(shè)計、大學(xué)生創(chuàng)新立項的場所。研究生日常生活的大部分時間都在實驗室中：做實驗、看文獻(xiàn)、休息、組會討論等。隨著開放課題、大學(xué)生創(chuàng)新立項使大量本科生進(jìn)入實驗室，造成大量人員在有限空間內(nèi)流動，這些給實驗室安全管理帶來巨大的挑戰(zhàn)。人員復(fù)雜，人數(shù)眾多是微生物實驗室安全問題管理的重點。
科學(xué)研究是科研實驗室的主要任務(wù)，實驗室往往重點關(guān)注基礎(chǔ)知識和實驗技能的掌握，而忽視了實驗室安全教育。大多數(shù)科研實驗室并沒有對新進(jìn)入實驗室的學(xué)生進(jìn)行過系統(tǒng)、全面的安全教育培訓(xùn)。學(xué)生對于實驗室存在的安全隱患缺乏了解，對于實驗中可能會發(fā)生的事故缺乏應(yīng)對的措施，極易將實驗中的小事故演變成大災(zāi)難。
二、微生物科研實驗室存在的安全隱患及其應(yīng)對措施
1.實驗室水、火、電等的安全。
安全隱患：實驗室水、火、電等的安全是實驗室安全的重點，也是容易忽視和事故常發(fā)的環(huán)節(jié)。在微生物學(xué)實驗室經(jīng)常用到高壓滅菌鍋、酒精燈、電烘箱等儀器，實驗室中還有大量易燃易爆的有機溶劑及各種壓縮氣體，如果設(shè)備和試劑擺放不當(dāng)或使用不合理，極易造成危險事故。實驗室中電器設(shè)備較多，有些設(shè)備如通風(fēng)櫥、搖床、培養(yǎng)箱、烘箱等擺放密集并且常年處于運轉(zhuǎn)狀態(tài)，實驗室常常出現(xiàn)插排數(shù)量大，擺放亂的情況，長期使用容易造成線路老化，產(chǎn)生漏電現(xiàn)象或者自燃造成火災(zāi)。
應(yīng)對措施：節(jié)約用水，經(jīng)常檢查上下水是否完好；需要使用明火或者易燃易爆品的實驗要在專門的房間進(jìn)行實驗，易燃易爆品需要單獨存放，注意通風(fēng)和溫度；固定儀器的位置，請專業(yè)技術(shù)人員將涉及的電路進(jìn)行合理設(shè)計和布排，大功率設(shè)備使用專線，減少插排的使用。安裝防漏電裝置，需要對設(shè)備和電路進(jìn)行定期檢查和維護(hù)。
2.實驗試劑和藥品的安全。
安全隱患：高校微生物學(xué)實驗室的強酸、強堿、有機溶劑、核酸染料等有毒有害藥品，這些藥品大多都無色無味，且具有極高的毒性和社會危害性，如果未按照規(guī)定使用，不僅會給操作者帶來極大的危害，還會造成實驗室環(huán)境的污染，嚴(yán)重威脅實驗室?guī)熒踩娝釓妷A等腐蝕性藥品，可能會腐蝕操作者的衣服和皮膚；有些試劑易揮發(fā)，通過呼吸系統(tǒng)吸入后會對人體健康造成危害；核酸染料等致畸致突變類藥品，這類藥品無色無味、劑量小，不易察覺但危害大，應(yīng)設(shè)置專門操作區(qū)域，禁止在非操作區(qū)域內(nèi)進(jìn)行相關(guān)實驗；無菌操作中常用到無水乙醇進(jìn)行消毒滅菌，極易引起燃燒，造成燒傷。
應(yīng)對措施：規(guī)范實驗室試劑的存放，將藥品和試劑集中存放，并對其進(jìn)行編號統(tǒng)計，便于查找和保存。對于有毒試劑實行專人保管，嚴(yán)格使用登記使用制度。有條件的實驗室應(yīng)當(dāng)將藥品集中存放在單獨的房間內(nèi)；試驗操作過程戴手套戴口罩，對于揮發(fā)性試驗需要在通風(fēng)廚中進(jìn)行；實驗中產(chǎn)生的廢棄物需分類后進(jìn)行收集分離處理，不能隨意亂扔亂倒。
3.生物安全。
安全隱患：微生物學(xué)實驗室研究的對象是微生物，肉眼不可見但是對人身體健康有很大的影響，有些微生物是條件致病菌，在免疫力低、有開放性傷口的情況下容易感染從而加重病情；帶有抗性標(biāo)記的生物材料或者其他有害材料如果不經(jīng)處理就丟棄會對環(huán)境造成嚴(yán)重危害。
應(yīng)對措施：實驗室需指定專門人員實驗室菌株管理和保藏工作，嚴(yán)格菌種使用登記制度。菌株是微生物實驗室最寶貴的資源，應(yīng)該規(guī)范菌株保藏方法，使每個學(xué)生都能掌握微生物的菌株保藏方法，并且養(yǎng)成菌株保藏的習(xí)慣。定期地對菌株進(jìn)行保藏，并在每個同學(xué)畢業(yè)時做好菌株的交接工作。對于實驗過程中使用過的任何生物材料在丟棄之前需要進(jìn)行滅菌處理。
4.大型儀器使用安全。
安全隱患：隨著實驗室的發(fā)展，科研實驗室引進(jìn)了許多分子生物學(xué)、蛋白表達(dá)純化、高壓液相色譜等先進(jìn)實驗儀器，這些大型儀器是實驗室寶貴的資源和資產(chǎn)，也是科學(xué)研究的重要工具，儀器設(shè)備的管理水平直接反映實驗室的工作效率。這些大型儀器如果操作不當(dāng)，不僅可能危害操作人員的人身安全，也會造成儀器的損壞，影響實驗的正常進(jìn)行和實驗結(jié)果的可靠性。實驗室大型儀器的安全包含兩個層次：人員的安全和儀器的安全。氣相色譜儀、液相色譜儀等大型儀器，在使用過程中會使用大量揮發(fā)性有機溶劑。高速離心機、電轉(zhuǎn)儀等儀器，如果不按照操作流程操作可能會對實驗人員的身體造成損傷。
應(yīng)對措施：大型儀器的管理應(yīng)實行專人負(fù)責(zé)制，每個人負(fù)責(zé)三到四臺儀器。在使用前需要經(jīng)過專門的培訓(xùn)，通過培訓(xùn)考試合格后方能上機使用。在使用過程中定期對儀器進(jìn)行清洗保養(yǎng)和維護(hù)，以保障實驗的順利進(jìn)行。
三、制定安全制度，加強安全管理
1.生活區(qū)與實驗區(qū)分開：將學(xué)生在實驗室的生活用品跟實驗用品分開，嚴(yán)禁在實驗室喝水、吃東西。學(xué)生做實驗必須穿實驗服，并嚴(yán)禁將實驗用品帶入生活區(qū)。
2.實驗區(qū)按照功能進(jìn)行分區(qū)：滅菌區(qū)、無菌操作區(qū)、蛋白操作區(qū)和電泳區(qū)等。對每一部分可能涉及的有毒有害物品或存在的安全隱患進(jìn)行標(biāo)注，貼在該區(qū)域醒目的位置，并在提醒標(biāo)語旁設(shè)置手套、口罩、護(hù)目鏡等防護(hù)用品。
3.建立安全值班制度：每天安排人員值班，值班人員最后一個離開，負(fù)責(zé)檢查實驗室的水、電、火及門窗的安全，檢查儀器是否關(guān)閉，是否處于正常運行狀態(tài)，并做好。
4.加強教育：結(jié)合發(fā)生的案例，定期對學(xué)生進(jìn)行實驗室安全教育；在可能存在危險的區(qū)域標(biāo)記危險警示；在實驗室醒目位置懸掛實驗室安全管理條例；對可能出現(xiàn)的常見危險情況進(jìn)行演練，加強對滅火器使用，提升應(yīng)對突發(fā)狀況的能力；學(xué)會割傷、燙傷的急救方法，在實驗室設(shè)立專門的急救箱。
四、小結(jié)
實驗室安全是微生物科研實驗室進(jìn)行研究的保障，也是長期以來容易被忽視的問題。隨著實驗室人員和承擔(dān)的科研項目越來越多，實驗室儀器的種類和數(shù)量大量增加，使實驗室的安全和管理問題日益突出。安全有序的實驗環(huán)境是實驗順利進(jìn)行的保證。微生物科研實驗室應(yīng)該牢記始終把安全問題放在第一位，按照相關(guān)的生物安全標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，建立并完善實驗室安全管理制度和規(guī)范微生物安全操作，加強對學(xué)生的安全教育，并結(jié)合本實驗室本身的情況及時對實驗室進(jìn)行規(guī)范和調(diào)整，避免實驗室安全事故的發(fā)生。
參考文獻(xiàn)：
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中圖分類號：R197.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）16-0064-02
現(xiàn)今社會，在社會熱點中，微生物及其產(chǎn)生的各類毒素引發(fā)的污染備受關(guān)注。因此，做好微生物實驗室的質(zhì)量控制對監(jiān)控食品安全至關(guān)重要。本文就微生物實驗的質(zhì)量控制進(jìn)行探討。
1 專業(yè)人員的素質(zhì)
專業(yè)技術(shù)人員在微生物檢驗過程中應(yīng)當(dāng)具有較豐富的專業(yè)知識和較強的分析判斷能力。同時要有良好的職業(yè)道德，有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度和高度的責(zé)任心；檢驗結(jié)果應(yīng)當(dāng)準(zhǔn)確、可靠，因此加強檢驗人員質(zhì)量管理教育和技術(shù)業(yè)務(wù)的培訓(xùn)顯得及其必要?？啥ㄆ诮M織專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)和進(jìn)修學(xué)習(xí)，促使檢驗人員對新理論、新技術(shù)、新方法及時掌握，培訓(xùn)工作應(yīng)作為持久的、長效的專業(yè)技術(shù)人員提高素質(zhì)的重要工作內(nèi)容。將定期考核納入實驗室內(nèi)部管理體系，作為檢驗員檢驗?zāi)芰皹?biāo)準(zhǔn)熟練程度的一個驗收程序。
2 儀器設(shè)備的控制
微生物實驗室主要檢驗用設(shè)備有：生物安全柜、冰箱、培養(yǎng)箱、高壓滅菌器、凈化臺、顯微鏡、蒸餾設(shè)備等。儀器設(shè)備應(yīng)嚴(yán)格按照出廠提供的有關(guān)規(guī)定和方法正確使用，同時注意儀器設(shè)備的質(zhì)量控制，制定相關(guān)質(zhì)量管理文件，嚴(yán)格對照其中儀器設(shè)備管理程序的規(guī)定執(zhí)行。
2.1 儀器的采購
購置儀器過程中，須對其技術(shù)指標(biāo)、性能進(jìn)行進(jìn)行考察了解，并經(jīng)過有效論證后方能采購。采購貴重、大型設(shè)備儀器時，供貨方應(yīng)對儀器進(jìn)行安裝、調(diào)試、核準(zhǔn)。確認(rèn)所有技術(shù)條件符合規(guī)定記錄驗收報結(jié)果后，即可交付使用，使用過程中須明確保管人。
2.2 儀器設(shè)備的建檔備案
對儀器設(shè)備進(jìn)行建檔備案，建立儀器設(shè)備卡（應(yīng)標(biāo)明設(shè)備名稱、編號、型號、生產(chǎn)廠名稱、產(chǎn)地和價款、采購時間、啟用時間、出廠編號等），歸整使用說明書、 檢定/校準(zhǔn)證書、合格證和使用維護(hù)記錄等至統(tǒng)一檔案盒內(nèi)管理保存。
2.3 儀器設(shè)備的檢定和校準(zhǔn)
定期對強制性檢定的儀器和設(shè)備進(jìn)行校準(zhǔn)，檢定的計量部門須具有相應(yīng)的資歷，儀器檢定合格后方可使用。儀器被移動過、維修過或使用一段時間后，檢測結(jié)果會造成一定影響，這時要對儀器進(jìn)行期間核查。定期按儀器自校規(guī)程對不屬于強檢的儀器進(jìn)行自校，據(jù)儀器情況貼"合格”“準(zhǔn)用”或“停用”標(biāo)簽。
3 試劑、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、質(zhì)控物的質(zhì)量控制
3.1 培養(yǎng)基的質(zhì)控
（1）培養(yǎng)基的購置與保存。購置培養(yǎng)基時注意選擇質(zhì)量和信譽好的公司，要購買質(zhì)量可靠、未過期、品質(zhì)優(yōu)良的培養(yǎng)基。
微生物實驗室收到培養(yǎng)基后，實驗室應(yīng)有培養(yǎng)基的收貨記錄，記錄詳單應(yīng)包括生產(chǎn)商家培養(yǎng)基的名稱、接收日期、批號、有效期、包裝及其完整性。培養(yǎng)基在使用前，應(yīng)有專人對培養(yǎng)基經(jīng)過驗證合格，不同批次的培養(yǎng)基應(yīng)做實驗對照。培養(yǎng)基一般應(yīng)貯存于陰涼干燥處，避免強光直射。有特別說明的培養(yǎng)基須嚴(yán)格按照廠商提供的要求進(jìn)行貯存和使用。
（2）培養(yǎng)基的使用。嚴(yán)格按照實驗操作手冊規(guī)定對培養(yǎng)基進(jìn)行配制操作。記錄配制量與操作者、日期，并于包裝上標(biāo)明使用期限，定期做質(zhì)量檢查，以保證其有效性。檢驗人員應(yīng)熟練掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)，按照相應(yīng)的壓力和溫度要求對實驗用器材（培養(yǎng)皿、三角瓶、移液管等）及培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌處理。含糖類培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)注意控制在允許溫度范圍內(nèi)，以避免營養(yǎng)成分的喪失。培養(yǎng)基配制用水主要為蒸餾水、離子水或經(jīng)處理后無干擾劑和抑制劑的水。配置用水的電阻率應(yīng)300000Ω/cm（25℃的情況下）以上，重金屬含量0.05mg/L以下。培養(yǎng)基溶解后，應(yīng)注意調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值符合相應(yīng)要求[2]。定期檢查培養(yǎng)基的顏色和透明度，一旦發(fā)現(xiàn)異常，則舍棄不用。每批培養(yǎng)基均應(yīng)做無菌試驗和已知菌株對照試驗，確保培養(yǎng)基的配制正確、消毒達(dá)到要求以及操作過程未受污染。如因原料保管不善而變質(zhì)或過期的試劑應(yīng)棄去。
3.2 試劑及血清制品的質(zhì)量控制
（1）實驗過程中，按照要求選用不同等級試劑。試劑須按照相關(guān)要求定期更換，部分試劑要求現(xiàn)用現(xiàn)配。配好各種試劑后，填寫標(biāo)簽均注明試劑名稱、配制日期、有效期、配制者及配置日期，并作好相關(guān)記錄。為確保試劑的準(zhǔn)確可靠性，定期應(yīng)做試劑性能測試，具體間隔時間視試劑的穩(wěn)定性和使用頻率而定。如氧化酶試劑須每次使用前測試，靛基質(zhì)試劑相對穩(wěn)定可每周進(jìn)行1次測試。每次配制好的染色液應(yīng)當(dāng)進(jìn)行檢測，常用染色液（如革蘭染液）每周檢測1次，不常用染色液在每次使用前[1]。為確保試劑穩(wěn)定性，選用適當(dāng)?shù)馁A存方法對試劑貯存。如：氧化酶試劑一般置于棕色瓶于4℃冰箱保存。
（2）酶、抗血清等生物制品具有生物活性，應(yīng)該注意其有效期，過期則舍棄不用。按說明要求進(jìn)行診斷血清的使用和保存，一般要求置于4℃冰箱貯存。在操作過程中要盡快取用，暴露室溫過久則易造成其失效。操作前，尤其要注意這些生物制品的有效期和效價。一般第一次使用時，須用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株檢查抗血清的有效性，常規(guī)工作中每月對其進(jìn)行檢測1次。如出現(xiàn)任何顏色的改變或混濁，即不能使用。
4 實驗室環(huán)境控制
實驗室的環(huán)境影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此實驗室應(yīng)當(dāng)在室內(nèi)光線，空氣流通，設(shè)施布局等方面應(yīng)符合要求，不能對檢測結(jié)果的可靠性、有效性和準(zhǔn)確性造成干擾，同時還要起到對工作人員的自身安全和儀器一定的保護(hù)作用。微生物檢驗應(yīng)在潔凈區(qū)（包括超凈工作臺或潔凈實驗室）進(jìn)行，潔凈區(qū)應(yīng)有明顯標(biāo)示。無菌室潔凈程度要達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，每次使用前需要紫外線燈消毒45min以上，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢驗方法，定期對紫外線空氣消毒效果進(jìn)行測定。微生物實驗室的空氣質(zhì)量、溫濕度要每天進(jìn)行監(jiān)測，并做好記錄，以確保檢測結(jié)果的可靠性、有效性和準(zhǔn)確性。
參考文獻(xiàn)
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【中圖分類號】R9【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1671-8801（2012）12-0143-01
在微生物檢驗的過程中，如何避免實驗過程中的可變因素對檢測結(jié)果的影響，評估檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、比較結(jié)果和具體設(shè)定的目標(biāo)之間的差距，保證結(jié)果的真實、可靠和可重復(fù)性，是質(zhì)量控制的主要目的。
實驗室質(zhì)量控制包含三部分內(nèi)容，即室內(nèi)質(zhì)量控制、質(zhì)量保證、室間質(zhì)量控制。
1微生物實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制
是根據(jù)本實驗室實際情況設(shè)計的質(zhì)量控制系統(tǒng)，僅用于對本實驗室的工作進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測和評價。包括對實驗人員、實驗步驟、儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基、試劑、環(huán)境設(shè)施的監(jiān)控。室內(nèi)質(zhì)量控制是檢驗結(jié)果精確可靠的核心和依據(jù)。
實驗人員及培訓(xùn)：
1.1實驗人員。由于微生物學(xué)檢驗是一種復(fù)雜的實驗，從事微生物學(xué)檢驗的技術(shù)人員，必須經(jīng)過嚴(yán)格的基礎(chǔ)訓(xùn)練和教育，包括微生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等知識的學(xué)習(xí)以及專業(yè)化的實驗技能培訓(xùn)，并通過專業(yè)技術(shù)考核，合格后才能持證上崗[1]。除此之外，特別需要培養(yǎng)的是檢驗人員高度的責(zé)任心和嚴(yán)謹(jǐn)求實的科學(xué)態(tài)度。
1.2專業(yè)指導(dǎo)資料。現(xiàn)在是信息和科技飛速發(fā)展的時代，技術(shù)更新非?？?，要想把握檢驗技術(shù)發(fā)展的脈搏，跟上知識發(fā)展的步伐，除了掌握作業(yè)指導(dǎo)書的內(nèi)容，還必須大量閱讀專業(yè)參考書，及時汲取新知識，更新方法。
1.3質(zhì)控物的要求。
1.3.1標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株的來源。標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株必須來自權(quán)威機構(gòu)或認(rèn)可部門[2]，如我國的衛(wèi)生部藥品生物制品鑒定所菌種保藏中心、美國菌種保藏中心（ATCC）、英國國家菌種保藏中心（NCTC）等。
1.3.2標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株的選擇。應(yīng)根據(jù)每項試驗的性質(zhì)的不同和對標(biāo)準(zhǔn)菌株的生物學(xué)性狀的要求，選擇作為質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)菌株。無論是定性試驗還是定量試驗，質(zhì)量控制系統(tǒng)要有足夠的靈敏度檢測出試驗中出現(xiàn)的誤差，因此質(zhì)量的監(jiān)測點必須設(shè)在一個敏感的位置。這個敏感點，對定性試驗，應(yīng)在較弱陽性的范圍內(nèi)；對于定量試驗，則應(yīng)位于解釋試驗結(jié)果的決定性水平附近。
1.3.3標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株的管理。每個微生物實驗室應(yīng)建立健全嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株的管理制度[3]，包括標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株的保管制度、請領(lǐng)制度、使用制度、銷毀制度等，并在文件中明確職責(zé)，嚴(yán)防標(biāo)準(zhǔn)（毒）菌株外泄。
1.4質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
1.4.1培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。通常以細(xì)菌能否在培養(yǎng)基中生長良好或能否形成典型菌落來衡量?；A(chǔ)培養(yǎng)基要求細(xì)菌不僅能夠生長，還必須發(fā)育良好并能使細(xì)菌充分表現(xiàn)出其典型的特征。選擇培養(yǎng)基在原則上應(yīng)使用預(yù)期最難生長的細(xì)菌菌種，并且應(yīng)少量接種（如0.5McFarlang1∶10稀釋接種0.001ml）。要求被抑制的菌種不生長或生長較弱，被選擇生長的菌種生長良好。生化培養(yǎng)基，用作質(zhì)量控制的菌種應(yīng)包括該生化反應(yīng)為陽性反應(yīng)和陰性反應(yīng)的細(xì)菌。
1.4.2試劑和染色液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。試劑和染色液必須注明配制或購入的日期；按試劑要求的貯存條件貯存并在有效期內(nèi)使用；對穩(wěn)定性較差的試劑，必須在試驗的同時進(jìn)行陽性和陰性對照試驗。
1.4.3抗血清的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?？寡宓膩碓幢仨毧煽?，并按制造商的使用說明使用與保存。在每次使用前應(yīng)觀察是否澄清透明，任何混濁與顏色改變，應(yīng)視為雜菌污染，不應(yīng)使用。
1.5儀器監(jiān)控。
1.5.1高壓滅菌器和干熱滅菌器。新購買的滅菌器必須進(jìn)行滅菌性能檢測，以后定期（每月1次）檢測。大容量滅菌器還應(yīng)在不同部位放置化學(xué)指示卡以全面評價滅菌性能。滅菌效果監(jiān)控使用生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953、12980的培養(yǎng)液或菌片（含菌量為5×10 6/片）。
1.5.2培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱。在每日工作開始和結(jié)束時記錄溫度，定期檢定和校正溫度計，水浴箱需要定期加水，冰箱需定期除霜。
1.5.3二氧化碳培養(yǎng)箱。須每天檢查箱內(nèi)的CO2含量，可用淋病奈瑟氏菌或腦膜炎奈瑟氏菌等CO2依賴細(xì)菌進(jìn)行生長試驗。
1.5.4厭氧罐或厭氧箱。在罐中或厭氧箱內(nèi)用美藍(lán)或刃天青作為指示劑，無氧時均無色。罐中的催化劑鈀顆粒須經(jīng)常置160℃1.5h重新活化。
1.5.5生物安全柜。若需更換濾網(wǎng)，則須由專門技術(shù)人員進(jìn)行，對紫外線必須每3個月檢查1次消毒性能。
1.6環(huán)境設(shè)施的監(jiān)控。環(huán)境設(shè)施（無菌間、超凈工作臺或?qū)恿鳚崈羰遥πl(wèi)生微生物檢驗的質(zhì)量影響較大，應(yīng)定期監(jiān)測其無菌效果，以保證其符合樣品檢測所需的環(huán)境要求。
2微生物實驗室質(zhì)量控制的保證
質(zhì)量保證是實驗室報告的質(zhì)量得到保證的全過程，是指為達(dá)到既定的質(zhì)量水準(zhǔn)所采取的一切必要措施。在質(zhì)量控制項目中設(shè)計的步驟不能只限于實驗室的技術(shù)操作步驟，收集合適的樣本，采取正確的保存方式，在規(guī)定時間內(nèi)送往實驗室等都將影響檢測的質(zhì)量。
3微生物實驗室室間質(zhì)量控制
是由實驗室以外的組織或機構(gòu)對其已達(dá)到的質(zhì)量水準(zhǔn)進(jìn)行的評價。通過室間質(zhì)量評價可以考察實驗室檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，并檢查和評估不同實驗室操作的差異。
3.1盲點實驗。考核組織者可不定期將標(biāo)準(zhǔn)菌株及模擬標(biāo)本混合，送到受試實驗室，進(jìn)行未知樣本的質(zhì)量控制，可以比較準(zhǔn)確地反映受控實驗室的實際水平和能力。
3.2實驗室室間質(zhì)量考核的作用。是對實驗室檢測水平的中和判斷，發(fā)現(xiàn)實驗室內(nèi)質(zhì)控難以發(fā)現(xiàn)的偏差和系統(tǒng)誤差，有利于誤差的糾正和消除，既提高了檢驗人員的操作水平，也增強了檢驗人員分析和解決問題的能力，是實驗室質(zhì)量保證的重要工具。
4討論
疾病預(yù)防控制中心微生物實驗室應(yīng)參與室內(nèi)全面質(zhì)量控制，并根據(jù)自身的特點設(shè)置質(zhì)控物，對實驗過程中影響檢測質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行控制和監(jiān)督，以發(fā)現(xiàn)誤差并及時改進(jìn)，確保檢測結(jié)果的精確性。此外，實驗室還應(yīng)定期參加實驗室間的考核和能力驗證活動，并了解本實驗室在本地區(qū)或全國實驗室中的技術(shù)地位，有利于實驗室技術(shù)水平的提高。因此一個常規(guī)實驗室，應(yīng)該盡可能參加范圍更加廣泛的室間質(zhì)量控制評定活動。疾病預(yù)防控制中心微生物實驗室的室間質(zhì)量控制評價，還應(yīng)增加對各參加考核的實驗室進(jìn)行常規(guī)性的檢查，如質(zhì)量控制的各種制度制定情況、執(zhí)行情況，以及未知標(biāo)本的盲點質(zhì)量控制等內(nèi)容，以使室間質(zhì)量評價工作更加科學(xué)和規(guī)范。
參考文獻(xiàn)
伴隨社會經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)得到顯著提高，院內(nèi)感染監(jiān)測成為醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要內(nèi)容。在院內(nèi)領(lǐng)導(dǎo)的高度關(guān)心和重視下，院內(nèi)感染監(jiān)控工作從組織落實到制定嚴(yán)格管理制度，采取的措施具有多樣化，在臨床中展開必要的監(jiān)測，從而使院內(nèi)感染監(jiān)測工作逐漸走向科學(xué)化、制度化、規(guī)范化。醫(yī)院是病患最集中的場所，各種各樣的病患每天都聚集到醫(yī)院等待治療，因此，院內(nèi)環(huán)境極易受到病原微生物的感染，我院為此成立感染監(jiān)測科和微生物檢測實驗室，以便適應(yīng)全國各級醫(yī)院對院內(nèi)感染防控與監(jiān)測工作的需求。文章對在院內(nèi)感染監(jiān)測中微生物實驗室設(shè)立的重要性進(jìn)行分析、探討，報道如下。
1按照有關(guān)規(guī)定配合院內(nèi)感染監(jiān)測科做好感染預(yù)防與監(jiān)控工作
微生物實驗室在臨床檢驗中最主要的工作就是對引發(fā)院內(nèi)感染的病原菌類型進(jìn)行確定。按照《消毒管理條例》、《醫(yī)院感染管理辦法》和其它預(yù)防院內(nèi)感染的實施策略，建立抗菌藥物合理使用條例，細(xì)菌檢測制度等。對各科室感染條例執(zhí)行情況進(jìn)行監(jiān)督，和被監(jiān)測科中的醫(yī)護(hù)人員定期進(jìn)行討論、交流，按照監(jiān)測具體數(shù)據(jù)向各監(jiān)測科提出科學(xué)意見。微生物檢驗實驗室委派專業(yè)人員配合院內(nèi)感染檢測工作，同時定期參加國家級院內(nèi)感染培訓(xùn)，和院內(nèi)感染科一起監(jiān)督相關(guān)條款，并將所有規(guī)定落到實處。
2監(jiān)測方法與內(nèi)容
2.1監(jiān)測方法 在院內(nèi)各病房及有關(guān)科室中都配備一名專業(yè)感染監(jiān)測控制人員，每月定期進(jìn)行一次檢查。同時在微生物檢驗實驗室中展開細(xì)菌監(jiān)測工作，對院內(nèi)消毒不合格的內(nèi)容徹底清查，找到消毒不合格原因和存在的問題，不僅能防止類似事件再次出現(xiàn)，同時還能為院內(nèi)感染監(jiān)控提供可靠數(shù)據(jù)。倘若消毒不合要求，應(yīng)立即重新消毒，一切合格后才能繼續(xù)使用，防止院內(nèi)產(chǎn)生交叉感染。提高重點科室環(huán)境與日常用品的感染監(jiān)測工作，包括：胃鏡科、口腔科、供應(yīng)室、產(chǎn)房、檢驗科、外科等，以便傳染源的及早發(fā)現(xiàn)。按照微生物檢驗實驗室的監(jiān)測結(jié)果，定期向院內(nèi)感染科總結(jié)、匯報，通過分析感染病原菌，確定下一步工作重點，為今后工作制定合理計劃。
2.2監(jiān)測內(nèi)容 微生物檢驗實驗室的監(jiān)測內(nèi)容主要有以下幾點：①環(huán)境監(jiān)測，包括：醫(yī)護(hù)人員的手、空氣、高壓滅菌裝置、物品表面、醫(yī)療器械等物品的細(xì)菌量，避免醫(yī)療物品、醫(yī)療器械和醫(yī)護(hù)人員的手被病原菌污染后，傳染給病患；②提高一次性醫(yī)療用品的監(jiān)測管理力度，對其質(zhì)量嚴(yán)格把控；加強重點科室致病菌的監(jiān)測，包括：金色葡萄球菌、沙門菌屬、化膿菌等；③一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)菌異?；蚴钱a(chǎn)生流行趨勢，應(yīng)向有關(guān)科室及時通報，并向院內(nèi)感染監(jiān)測科匯報，采取相應(yīng)措施，阻斷病原菌傳播途徑，做好預(yù)防控制工作，保護(hù)易感染人群，努力為病患建立良好醫(yī)療環(huán)境，同時提升醫(yī)護(hù)質(zhì)量；④減少院內(nèi)感染發(fā)病率，使用有效措施保護(hù)病患、醫(yī)護(hù)人員以及社會民眾的健康。
3提高病原菌耐藥性的監(jiān)測
在微生物檢驗實驗室中鑒定分離病原菌對抗感染治療與細(xì)菌耐藥性監(jiān)測具有重要意義，所以，要將質(zhì)量保證制度完善，應(yīng)提高與臨床治療之間的配合。在使用美國臨床檢測試驗（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)對藥物敏感實驗進(jìn)行規(guī)范，藥物敏感實驗中使用的抗生素一定要實用、科學(xué)、經(jīng)濟(jì)、合理，提高微生物檢驗實驗室在院內(nèi)感染監(jiān)測工作中的職能，正確評價并解讀實驗結(jié)果，及時公布院內(nèi)病原菌的耐藥性，為抗生素的臨床使用提供科學(xué)依據(jù)。
4將細(xì)菌耐藥性的檢測結(jié)果定期在院內(nèi)公布，同時對細(xì)菌耐藥性實施網(wǎng)絡(luò)管理
熟練掌握美國臨床檢測試驗（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)，這是判斷抗菌藥物敏感實驗結(jié)果可靠性與準(zhǔn)確性的重要內(nèi)容?，F(xiàn)階段，選取治療感染性疾病的抗菌藥物在大多數(shù)情況下，醫(yī)生是按照經(jīng)驗選擇的，但是經(jīng)驗選藥也需要流行病資料和循征醫(yī)學(xué)的支持，將細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測結(jié)果定期在院內(nèi)公開，統(tǒng)計并分析重癥監(jiān)護(hù)病房等重要科室中常見病原菌的耐藥與分布情況，對經(jīng)驗選取抗生素、提升重癥感染性疾病救治成功率幫助很大。分區(qū)域并長時間建立耐藥監(jiān)測網(wǎng)，經(jīng)過研究分析，很容易得出本區(qū)域耐藥病菌發(fā)展趨勢和抗生藥物的耐藥性，有助于制定本區(qū)域抗生素藥物的使用，同時對經(jīng)驗用藥具有十分重要的意義。
5結(jié)論
目前，我國臨床治療中微生物檢驗實驗室的建立和國際先進(jìn)水平相比依然存在很大差距，和我國院內(nèi)病原菌以及感染性疾病的耐藥性存在嚴(yán)重不相適應(yīng)的現(xiàn)狀；并且，臨床治療有關(guān)部門以及檢驗科有關(guān)人員對微生物檢驗實驗室的日常運作、軟件與硬件建設(shè)缺少重視度。在各種不利條件下，微生物檢驗實驗室應(yīng)積極幫助臨床做好院內(nèi)感染性疾病的治療與診斷工作，并將其當(dāng)作最主要目標(biāo)執(zhí)行。這樣微生物檢驗實驗室才能更好的發(fā)展，為院內(nèi)感染性疾病的監(jiān)測、預(yù)防、治療、控制做出更多貢獻(xiàn)。
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【關(guān)鍵詞】：食品微生物檢測質(zhì)量控制
隨著人們生活水平的不斷提高，食品安全問題逐漸引起各國政府、公眾的重視。尤其近年來，隨著瘦肉精、三聚氰胺、毒膠囊、皮革奶等食品安全事件不斷曝光1，食品安全問題更成為社會各層面關(guān)注的焦點。食品安全問題中，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的問題2。微生物指標(biāo)不僅可用于對終產(chǎn)品的衛(wèi)生監(jiān)督管理，而且也是食品生產(chǎn)、運輸和銷售等全過程衛(wèi)生質(zhì)量控制的監(jiān)測手段3。為了提高食品的衛(wèi)生質(zhì)量，保證消費者飲食安全，食品微生物檢驗的方法由傳統(tǒng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)、血清試管凝聚試驗等逐漸發(fā)展到近年來的分子水平檢驗，并向儀器化、自動化、標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展4。但由于影響食品微生物檢測結(jié)果的因素復(fù)雜多樣，所以對食品微生物檢驗的各個環(huán)節(jié)加以合理有效的質(zhì)量控制，是提高食品微生物檢驗結(jié)果，保證食品安全的有效措施。
一、 樣品采集與處理
1、 采樣
食品微生物檢驗中，樣品的采集必須具有代表性。ICMSF制定的食品微生物學(xué)分析采樣方法5，目前已在國內(nèi)外被逐步推廣采用。應(yīng)嚴(yán)格遵循統(tǒng)計學(xué)方法，根據(jù)具體情況制定相應(yīng)的抽樣方案。一般應(yīng)采取完整未開封的樣品，如是散裝樣品，采樣必須在無菌操作下進(jìn)行。采樣的用具，應(yīng)預(yù)先經(jīng)滅菌處理。樣品的數(shù)量應(yīng)滿足檢驗、復(fù)驗、備查的需要。每個樣品要注明其詳細(xì)信息。
2、 送樣
有質(zhì)量保證的樣品是獲得正確檢驗結(jié)果的基礎(chǔ)。樣品應(yīng)盡快送到食品微生物檢驗室（
3、 收樣和處理
樣品送達(dá)實驗室后，先判定樣品是否已經(jīng)變質(zhì)和是否滿足檢驗標(biāo)準(zhǔn)。瓶裝檢樣處理時可用點燃的乙醇棉球燒灼瓶口滅菌，用石碳酸紗布蓋好，再用滅菌開瓶器將蓋啟開。袋裝樣品應(yīng)用75%乙醇棉球消毒袋口后進(jìn)行檢驗。固態(tài)樣品用均質(zhì)器以無菌操作方法處理樣品，調(diào)節(jié)均質(zhì)器均質(zhì)時間處理不同種類的樣品。微生物培養(yǎng)時要準(zhǔn)確記錄溫度、氣體濃度等參數(shù)，使其嚴(yán)格符合檢驗程序要求6。原始記錄應(yīng)及時記載，原始記錄格式要求有足夠的信息量，并具有可朔源性。
二、 實驗人員素質(zhì)與能力
實驗人員的素質(zhì)與能力影響到最終的檢驗結(jié)果。食品微生物學(xué)檢驗人員應(yīng)：有合法的上崗資質(zhì)；具有多方面的專業(yè)技術(shù)知識7；掌握微生物學(xué)的有關(guān)基礎(chǔ)知識；掌握并正確理解國家食品衛(wèi)生微生物檢驗方法、食品的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及本企業(yè)的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，熟悉標(biāo)準(zhǔn)化法的相關(guān)知識；熟悉計量學(xué)的基本知識、計量法令和法規(guī)及質(zhì)量保證體系知識；熟悉食品的生產(chǎn)工藝；及時主動更新自己的知識。
三、 食品微生物檢驗過程
1、 檢驗方法
食品微生物檢驗必須依據(jù)現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及衛(wèi)生行政部門頒布的檢驗方法進(jìn)行8。對于檢驗標(biāo)準(zhǔn)的變化，一般都有約定成俗的經(jīng)驗性規(guī)定。但是如何控制實際工作中“靈活性”不至于變成“非法性”，需要檢驗人員自主識別。
2、 檢驗環(huán)境
微生物檢驗室是進(jìn)行食品微生物學(xué)檢驗的地方，應(yīng)單獨設(shè)置，操作區(qū)與辦公區(qū)應(yīng)分開，避免室間污染和實驗室感染發(fā)生。無菌室要設(shè)有套間或緩沖間，最好設(shè)有推拉門，以防止空氣振動蕩。經(jīng)過培養(yǎng)后的培養(yǎng)物，經(jīng)無害化處理后方可排放、洗刷。對染菌物品及廢物，應(yīng)經(jīng)過消毒滅菌后才可清洗或廢棄，防止污染環(huán)境8。
3、 儀器和設(shè)備
微生物檢驗室應(yīng)配備充足的檢驗工作需要的儀器、設(shè)備和器材。儀器設(shè)備計量器具使用前應(yīng)經(jīng)計量鑒定部門鑒定合格后方可使用；儀器設(shè)備量具的量程、精確度等，要符合檢測項目的相應(yīng)要求；嚴(yán)格按操作規(guī)程要求使用，并做好運行檢查及儀器維護(hù)。
4、 培養(yǎng)基和試劑
購置培養(yǎng)基和試劑時要求供應(yīng)商提品質(zhì)控證書。培養(yǎng)基和試劑使用前首先通過外觀、批號、PH值、滅菌要求、選擇性等進(jìn)行初步評估，還要用陽性對照菌株做質(zhì)控。按照培養(yǎng)基和試劑標(biāo)簽說明的貯藏條件保存。不同批號的培養(yǎng)基和試劑不要混合使用。受潮變質(zhì)的干粉培養(yǎng)基堅決不能使用。自配的培養(yǎng)基要嚴(yán)格按照配制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配制和保存，保存培養(yǎng)基配制記錄。
5、 確證試驗
做平行樣，保證結(jié)果的可比性；設(shè)立空白對照，防止其它污染而導(dǎo)致的結(jié)果不準(zhǔn)確；設(shè)計適當(dāng)?shù)馁|(zhì)控頻率，進(jìn)行質(zhì)控試驗。將質(zhì)控菌株與常規(guī)工作一起進(jìn)行，不能為質(zhì)控菌株設(shè)計單獨操作程序，更不能專人專做。當(dāng)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株的內(nèi)在敏感性發(fā)生改變時要更換新的菌種。
6、 檢驗報告
檢測報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、明確、客觀地反應(yīng)檢驗結(jié)果，可以運用統(tǒng)計學(xué)知識對誤差進(jìn)行處理，并參照一定的標(biāo)準(zhǔn)對食品微生物的數(shù)量和質(zhì)量進(jìn)行系統(tǒng)性的評價。檢驗報告需經(jīng)有資格的審核人員核查簽字，并加蓋印章后生效。
四、 參加盲樣考核
積極參加上級業(yè)務(wù)部門下發(fā)的盲樣考核，即進(jìn)行實驗室間比對和中心質(zhì)量管理辦公室組織的人員比對驗證實驗。
總之，隨著社會的發(fā)展和科技進(jìn)步，食品微生物檢驗技術(shù)正向高效率、高標(biāo)準(zhǔn)、高精度和高靈敏度的方向發(fā)展，特別是近年來興起的基因芯片技術(shù)及自動微生物檢測系統(tǒng)。與此同時，更加嚴(yán)格的質(zhì)量控制方法必須伴隨檢測技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展，從而得出盡可能準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，更好的為人類公共衛(wèi)生、食品安全、營養(yǎng)健康與疾病預(yù)防等做出貢獻(xiàn)。
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在全國范圍內(nèi)普遍存在的造成醫(yī)院感染的因素主要包括：第一，醫(yī)院抗生素的不合理使用，抗生素的使用劑量、方法、時間等都達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)要求，長期這樣下去，藥量不足，血藥濃度過低，雖然可以抑制體內(nèi)病原菌的生長，但對于原本就存在于身體內(nèi)的病原菌根本就不能徹底的將其清除。隨著時間的推移，體內(nèi)的病原菌就會在人體內(nèi)生長繁殖。第二，慢性消耗性疾病和癌癥病人，由于自身免疫力低下，人體的某些部位的正常菌群就有可能導(dǎo)致病人自身感染。第三，在醫(yī)院內(nèi)很多儀器和內(nèi)窺鏡的使用，消毒不嚴(yán)格也有可能導(dǎo)致醫(yī)院感染，增加醫(yī)院感染的機會。第四，血液透析時透析液不合格，消毒液的濃度控制不合格等這些情況都會導(dǎo)致醫(yī)院感染。為此微生物實驗室在醫(yī)院感染控制中的重要性主要體現(xiàn)在：
一、正確鑒定醫(yī)院感染中所涉及的微生物
微生物實驗室對于醫(yī)院感染控制起到了不可忽視的作用。其中最重要的一個作用：正確鑒定醫(yī)院感染中所涉及的微生物。引起醫(yī)院感染的微生物有以下幾個特點：條件致病菌；耐藥性；某些微生物能夠在體外生長繁殖。為了能夠很好的控制醫(yī)院感染，就需要微生物實驗室能夠不斷掌握更多的微生物理論知識和技術(shù)鑒定水平，正確的分離和鑒定在醫(yī)院感染中所涉及的微生物，爭取在分離過程中做到標(biāo)準(zhǔn)化，力求做到鑒定分型準(zhǔn)確。微生物實驗室在控制醫(yī)院感染中要定時采集醫(yī)院環(huán)境標(biāo)本，如病房空氣、醫(yī)療器械、消毒液、工作臺面、手術(shù)室空氣、處置室空氣等，在采集病人標(biāo)本時要盡量在抗生素使用前，采集后立即送檢，不同標(biāo)本的處理得當(dāng)，這樣才能提高陽性檢出率，對于醫(yī)院感染起到了很好的控制作用。
二、促進(jìn)安全、和諧醫(yī)院的構(gòu)成
構(gòu)建安全和諧醫(yī)院從根本上來說是在新形勢下保證醫(yī)院得到更穩(wěn)定發(fā)展的重要前提。在對構(gòu)建和諧醫(yī)院的推動作用中，必須加強微生物實驗室組織的建設(shè)力度，才能增強醫(yī)院的和諧程度。因為和諧醫(yī)院的構(gòu)建離不開微生物實驗室的幫助和推動，只有微生物實驗室中的工作人員不斷的提高自己的專業(yè)水平，在工作中做好標(biāo)本采集、細(xì)菌鑒定、病原菌質(zhì)控等各項工作，才能從根本上控制醫(yī)院感染。另一方面，醫(yī)院的病原微生物實驗室同時也對醫(yī)護(hù)人員的良好醫(yī)德的形成起到了一定程度上的教育作用。要求醫(yī)護(hù)人員對待病人要持極端負(fù)責(zé)的態(tài)度和精益求精的精神。在工作中要自覺遵守醫(yī)院的各項有關(guān)規(guī)定和制度，要增強無菌觀念，在工作中端正自己的工作作風(fēng)，堅持正確的立場。只有構(gòu)建安全、和諧的醫(yī)院制度，才能在激烈的市場競爭中求得生存和穩(wěn)定的發(fā)展，使醫(yī)院在社會上具有良好的名譽和聲譽，也才能從更大程度上推動醫(yī)院的不斷發(fā)展。
三、定期的反饋實驗室資料，加強對醫(yī)院感染控制的管理
醫(yī)院微生物實驗室除了能夠正確的鑒定病原菌，促進(jìn)安全、和諧醫(yī)院的構(gòu)成，還定期的反饋微生物實驗室資料，在一定程度上加強了醫(yī)院的感染控制管理。臨床微生物實驗室應(yīng)該將實驗室在標(biāo)本采集和病原菌分離、培養(yǎng)和鑒定的過程中所獲得的相關(guān)資料、信息等及時的送到醫(yī)院感染控制科，并加強與臨床科室間的聯(lián)系，通過這種信息之間的監(jiān)測，改進(jìn)醫(yī)務(wù)人員的無菌觀。并對醫(yī)院感染控制的各種危險因素采取及時有效的措施，預(yù)防醫(yī)院感染的發(fā)生。另一方面，醫(yī)院的臨床微生物實驗室在醫(yī)院控制感染管理工作中，起到了一定的加強管理的作用。因為在工作中不可否認(rèn)的是有的微生物實驗室人員，輕視醫(yī)院各項規(guī)章制度，做事不負(fù)責(zé)；管理和檢查工作開展的不徹底，未能及時的發(fā)現(xiàn)潛在的安全隱患并及時將其消滅在萌芽中。加上種種方面的原因，一直是醫(yī)院控制感染管理工作的一大障礙。因此，醫(yī)院的微生物實驗室對于規(guī)范職能，加強醫(yī)院感染控制各部門的嚴(yán)格劃分，促使醫(yī)護(hù)人員在自己的義務(wù)和權(quán)利范圍內(nèi)做好本職工作和行使職權(quán)方面起到一定的控制作用。對醫(yī)院各種感染的危險因素加強管理，促使全院醫(yī)護(hù)人員都參與到醫(yī)院感染控制的工作中來，定期召開醫(yī)院各科室主任、護(hù)士長會議，對醫(yī)院每個階段的感染控制工作的開展情況進(jìn)行通報，使臨床科室在醫(yī)院感染控制工作中都能做到有的放矢。
綜上所述，醫(yī)院的臨床微生物實驗室在醫(yī)院中不僅能夠分離、培養(yǎng)和鑒定院內(nèi)的病原菌，同時還對促進(jìn)安全、和諧醫(yī)院的構(gòu)成，定期的反饋實驗室資料，加強對醫(yī)院感染控制的管理等工作起到了一定的推動作用。醫(yī)院感染控制是一項長期、循序漸進(jìn)、不容忽視的工作，微生物實驗室人員必須不斷提高自己的技術(shù)水平和理論素質(zhì)，推動醫(yī)院的感染控制工作走向。
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中圖分類號：G48 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
Suggestions of Food Microbiology Laboratory Practice Management
FAN Jinshan， LI Jing， CAO Qingguo
（Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry， Jurong， Jiangsu 212400）
Abstract Food microbiological testing of hygiene and safety in the protection of food particularly had a prominent role， so food microbiology laboratory management must also be standardized. From the aspects of management requirements and quality control of food microbiology laboratory， this paper elaborated several standardized management recommendations for the future of scientific management.
Key words food； food microbiology； management
在飛速發(fā)展的二十一世紀(jì)，隨著人們生活水平的提高，人們對食品已不再是僅僅滿足于飽腹，而是越來越多的強調(diào)食品的營養(yǎng)與衛(wèi)生，因此，食品衛(wèi)生安全受到了越來越多的關(guān)注，其中食品微生物檢測就是食品安全中一項必不可少的技術(shù)項目，是保證食品安全衛(wèi)生的重要手段，其中食品微生物檢測指標(biāo)主要包括菌落總數(shù)、大腸桿菌、致病菌、霉菌和酵母菌這五項。近年來，我國衛(wèi)生部每年接到食物中毒事件的報告在兩百起左右，其中大部分是由于致病菌引起的，因此食品微生物的危害是食品質(zhì)量安全的主要問題。另外，由于微生物所具有的生物學(xué)特征，食品很容易遭到微生物的污染，在很多食品加工環(huán)節(jié)中都很難控制，因此食品微生物實驗室的規(guī)范化管理尤為重要。本文就食品微生物實驗室的規(guī)范化管理談?wù)勔韵聨讉€方面的建議。
1 食品微生物實驗室的管理要求
1.1 食品微生物工作人員的要求
工作人員應(yīng)具有一定資質(zhì)的微生物學(xué)知識或相近專業(yè)的知識，能勝任工作所必需的設(shè)備操作和微生物檢測技能（如無菌操作、菌落技術(shù)等），定期進(jìn)行實驗室生物安全等方面的培訓(xùn)，進(jìn)行相關(guān)繼續(xù)教育計劃（如網(wǎng)絡(luò)視頻培訓(xùn)）。
在操作之前，工作人員必須嚴(yán)格進(jìn)行自身微生物的清潔，防止污染無菌室，這就要求工作人員必須穿無菌工作服，戴帽子、口罩，同時做好手部消毒，禁止吸煙。在操作過程中，注意不要人員過多，保持一定的關(guān)注度，這樣才能保證實驗的準(zhǔn)確度和精確度。
1.2 食品微生物實驗室的衛(wèi)生要求
實驗室定期清掃制度，按照內(nèi)容分工、區(qū)域包干的形式進(jìn)行衛(wèi)生大掃除，每天一小掃、一周一大掃，并定期做衛(wèi)生大檢查。有專人進(jìn)行帶有致病微生物的消毒滅菌工作，對實驗中廢棄的培養(yǎng)基和器具要進(jìn)行嚴(yán)格高壓蒸汽滅菌鍋，做好清洗工作，同時做好相應(yīng)的記錄，最后做好相應(yīng)工作總結(jié)，相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)做好定期檢驗，驗收各項管理進(jìn)程和執(zhí)行情況。
食品微生物實驗室應(yīng)建立微生物實驗室的滅蠅、除蟑螂和其他害蟲的防治計劃，室內(nèi)安裝滅蠅燈和紫外燈等，防止因有害昆蟲而引起實驗室內(nèi)細(xì)菌、病毒向外傳播的可能性。①
1.3 食品微生物實驗室的儀器管理要求
食品微生物實驗室的設(shè)備應(yīng)配有溫控設(shè)施（如培養(yǎng)箱、冰箱等）、測量器具（如電子天平、菌落計數(shù)器等）、定容設(shè)備（如移液管、微量移液器等）、滅菌設(shè)施（如高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺等）、其他設(shè)備（如顯微鏡、離心機等）。設(shè)備的操作使用方法應(yīng)明確掛墻，便于學(xué)習(xí)使用。設(shè)備應(yīng)定期檢驗其運行參數(shù)，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的性能參數(shù)，并符合相關(guān)檢查指標(biāo)。設(shè)備一旦出現(xiàn)故障不能正常使用，應(yīng)立即停止使用，并立即聯(lián)系廠家維修。
所有設(shè)備都應(yīng)做好設(shè)備信息登記（如設(shè)備名稱、購置時間、型號、制作廠商等）、使用情況登記表，這樣能實時監(jiān)測設(shè)備的運行情況，做好設(shè)備維護(hù)工作。對于一些儀器設(shè)備在操作上有一些特殊注意的地方，可以注明相應(yīng)的注意事項，便于操作和儀器的維護(hù)，如超凈工作臺旁邊溫馨提示“操作時請關(guān)閉紫外燈！”在顯微鏡上貼有“使用完油鏡注意清潔我哦！”另外設(shè)備在操作過程中應(yīng)有受過培訓(xùn)的工作人員在場作相應(yīng)指導(dǎo)，以防出現(xiàn)故障和意外。對一些特殊的設(shè)備要做好定期檢查，比如高壓蒸汽滅菌鍋必須定期進(jìn)行安全測試，超凈工作臺必須定期進(jìn)行紫外線強度測試。
1.4 食品微生物實驗室管理人員的要求
管理人員作為食品微生物實驗室管理者，除了應(yīng)該具備工作人員應(yīng)有的素質(zhì)外，還應(yīng)有一定的管理能力，包括實驗室的日常使用管理、實驗室設(shè)備使用指導(dǎo)和定期維護(hù)、統(tǒng)籌食品微生物的檢測工作安排、對突發(fā)事件的處理能力等。
另外，管理人員應(yīng)定期做好工作人員的相關(guān)培訓(xùn)，同時做好技術(shù)更新，提高那些有關(guān)食品微生物檢測的前言技術(shù)的關(guān)注度。管理人員和工作人員只有定期做好自身知識儲備工作，提高能力、經(jīng)驗等綜合素質(zhì)，做好繼續(xù)受教育計劃，建立良好的“技術(shù)支持體系”，這樣才能科學(xué)、規(guī)范地做好食品微生物的管理工作，完善實驗室的工作。
2 食品微生物實驗室的質(zhì)量控制
一套科學(xué)、嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系是決定實食品微生物驗室檢測結(jié)果是否準(zhǔn)確和精確的重要因素。除了有常見的“實驗室安全制度”、“學(xué)生行為規(guī)范守則”，還必須有明確的“工作人員操作守則”、“管理人員管理守則”等。實現(xiàn)質(zhì)量管理的方針目標(biāo)，有效地開展各項質(zhì)量管理活動，必須建立相應(yīng)的管理體系。
第一，微生物檢測室必需單獨設(shè)立，避免污染，同時要按工作流程配有準(zhǔn)備室、消毒室、緩沖室、無菌室、培養(yǎng)室、檢測室等；第二，所有涉及到食品微生物檢測的設(shè)備必須嚴(yán)格CIP體系進(jìn)行徹底，器具也要用新潔爾滅等化學(xué)消毒液進(jìn)行消毒；第三，無菌室作為檢測工作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，必需做好衛(wèi)生工作，保證無衛(wèi)生死角、清潔干燥、通風(fēng)良好，安裝紫外燈及空氣過濾設(shè)備等；第四，進(jìn)行微生物檢測的工作人員必需通過相應(yīng)的專業(yè)技能培訓(xùn)取得合法的上崗資質(zhì)外，同時嚴(yán)格按照GB/T4789-2003進(jìn)行微生物的檢測工作，熟悉標(biāo)準(zhǔn)化法的相關(guān)知識；第五，在實驗中所使用的試劑、培養(yǎng)基必需嚴(yán)格按照微生物檢測操作規(guī)程進(jìn)行配置，有利于食品微生物檢測的規(guī)范化；②第六，做好菌種保藏工作，保管人員要求做到細(xì)心、嚴(yán)格、科學(xué)的保管，每種菌種要單獨保存以防交叉污染，特定的菌種要特定保存，同時做好相應(yīng)的使用記錄、保存信息記錄，定期進(jìn)行菌種篩選、保養(yǎng)。
3 總結(jié)
隨著中國在入WTO以后，國際食品貿(mào)易交流越發(fā)頻繁，對食品衛(wèi)生安全的要求越來嚴(yán)格，進(jìn)、出口食品的衛(wèi)生除了要求出口食品符合我國相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定，接受國家相關(guān)進(jìn)出口商品檢驗部門監(jiān)督和檢驗外，還必須符合進(jìn)口國家對進(jìn)口食品的標(biāo)準(zhǔn)，其中對食品微生物的檢測也越來越苛刻，因此，如何進(jìn)行食品微生物實驗室的規(guī)范化管理是一件尤為重要的課題。目前，國家也出臺了相關(guān)條例，在一定程度上改變了目前微生物實驗室管理方面的問題，實驗室的未來正朝著標(biāo)準(zhǔn)化、法制化、實用性和安全性軌道發(fā)展前行。在現(xiàn)代社會，食品安全問題受到廣泛關(guān)注，而微生物檢測的重要性尤為突出，所以對于其科學(xué)管理的水平是未來食品微生物實驗室管理人員的重中之重。
我們對常用的儀器設(shè)備制定相關(guān)的作業(yè)指導(dǎo)書和檢定校準(zhǔn)計劃，特別重視對新購儀器和那些容易漂移儀器的檢定。制定儀器/設(shè)備清單，指定專人保管，每臺儀器設(shè)備上均須貼有明顯標(biāo)識，其中資產(chǎn)標(biāo)識包括編號、名稱、型號、生產(chǎn)廠家；狀態(tài)標(biāo)識：儀器設(shè)備分別以送檢、送校、自檢、自校表示其所檢定的狀態(tài)。校驗合格則貼有綠色合格證（計量編號、校驗日期和下次校驗日期），凡校驗不合格、過期、需報修的設(shè)備儀器應(yīng)貼有紅色停用證。為了保證正確使用各類儀器，做好使用和維修、保養(yǎng)記錄。維修后的設(shè)備/儀器重新檢定并校準(zhǔn)證明其功能指標(biāo)已恢復(fù)，做好完整的檢查記錄，方可使用。
為了做好常用儀器設(shè)備的質(zhì)量控制工作，我們把實驗室內(nèi)使用頻率高且需要監(jiān)控的儀器設(shè)備初步分為三類：（一）培養(yǎng)箱（普通培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、 冰箱，（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機、天平）；（二）小計量容器；（三）微生物測定儀器、微生物鑒定儀器、空氣采樣器、酶標(biāo)儀等。
1 溫度計 實驗室必須要有工作溫度計和參照溫度計，分別做好標(biāo)識。工作溫度計用于日常溫度檢查；參照溫度計用于校正工作溫度計。定期檢查溫度計的運行情況，一般半年一次。對溫度計日常檢查、校準(zhǔn)檢查和運行檢查，都應(yīng)做好相應(yīng)的技術(shù)記錄。
2 培養(yǎng)箱 根據(jù)培養(yǎng)物性質(zhì)及溫度要求，培養(yǎng)箱應(yīng)分別設(shè)置（以用途和溫度分）。培養(yǎng)箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不大于±1℃，箱體內(nèi)各點溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1℃。溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計的溫度，最好每天監(jiān)控1-2次，并做好記錄。
3 高壓滅菌鍋 實驗室常用生物指示菌法、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法對其滅菌效果進(jìn)行監(jiān)測。高壓滅菌鍋要由專人按作業(yè)指導(dǎo)書操作，并做好每一次的使用記錄。日常工作記錄應(yīng)包含以下信息：高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化。在使用高壓滅菌鍋時，鍋內(nèi)放置物品不宜過多，而且單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培養(yǎng)基）不能太多。同時應(yīng)注意內(nèi)容物不同耐受溫度。高壓后物品總的暴露時間最好不要超過45min。高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。
4 干燥滅菌箱 日常工作記錄中應(yīng)包括以下信息：開始的時間、到達(dá)滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關(guān)閉時間）。干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn)；用參考溫度計進(jìn)行溫度測試，溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h，后者為30min。干燥滅菌箱校準(zhǔn)時間一般為一年。
5 天平 要求放置在無振動、無氣流影響的水平臺面上，每次使用做好檢查記錄。天平作為計量儀器是列入國家強制檢定范圍的，一般1次/年進(jìn)行檢定。運行檢查頻率按運行計劃或按產(chǎn)品（天平生產(chǎn)廠家）給出的標(biāo)準(zhǔn)重量單位進(jìn)行對照。
6 pH計 使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。緩沖液使用有效期：PH4.00 有效期約1年； PH7.00 有效期約6個月；pH9.00 有效期約6個月。pH計要定期維護(hù)，電極外表要定期清洗，同時對電極敏感性進(jìn)行檢測及極性恢復(fù)。
7 超凈工作臺 要求潔凈度為100級，空氣沉降30min，細(xì)菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細(xì)菌數(shù)＜0.49個/皿.。凈化工作臺運行檢查頻次應(yīng)每月一次，主要是細(xì)菌沉降檢測。凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進(jìn)行粒子與細(xì)菌沉降檢測。
8 紫外燈 檢測方法包括儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中規(guī)定在距離照射1米處，要求強度為90。生物測試法就是采用一定的細(xì)菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射2min，同時設(shè)置普通光源的對照組，后置37℃培養(yǎng)48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達(dá)99%。
9 酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機 每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象；每周：清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰塵；每月：檢查洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求；每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進(jìn)行校準(zhǔn)并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時進(jìn)行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。酶標(biāo)儀工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。
10 移液器 定期（每年至少1次）校準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進(jìn)行校準(zhǔn)。 標(biāo)定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準(zhǔn)法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準(zhǔn)盒等。 校準(zhǔn)多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準(zhǔn)確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。
11 冰箱和孵育箱 每天檢查和記錄冰箱溫度，每個工作日檢查記錄孵育箱溫度，并做好記錄，使用經(jīng)過計量部門校準(zhǔn)合格的溫度計測量冰箱和孵育箱的實際溫度；根據(jù)不同規(guī)格冰箱和凍存樣品性質(zhì)對溫度要求不同，調(diào)節(jié)相應(yīng)的溫度。放置要求4℃保存的試劑盒的冰箱溫度應(yīng)在2～8℃；用于培養(yǎng)的孵育箱溫度誤差應(yīng)小于1℃；用于冷凍核酸和抗原檢測的血漿、淋巴細(xì)胞和病毒上清適宜在-70℃冰箱，要求冰箱溫度低于-65℃。
以上十一種儀器是我們?nèi)粘９ぷ髦惺褂妙l率較高的，對這些儀器設(shè)備的使用和管理我們積累了一些經(jīng)驗，日常工作中做好儀器的運行情況和使用記錄，以便及時發(fā)現(xiàn)問題。這樣就更能保證檢測過程的順利進(jìn)行，最終保證我們的檢測結(jié)果更科學(xué)更準(zhǔn)確。
參考文獻(xiàn)
［1］ 中國實驗室國家認(rèn)可委員會．實驗室認(rèn)可與管理基礎(chǔ)基礎(chǔ)知識［M］．北京：中國計量出版社，2003
［2］ 國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會．實驗室資質(zhì)認(rèn)定工作指南［M］．北京：中國計量出版社，2007
中圖分類號：G642 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-9795（2013）05（a）-0119-01
微生物學(xué)本身的特性決定了它很強的實驗性，而微生物實驗也就順理成章的成為微生物學(xué)不可或缺的重要組成部分。微生物學(xué)實驗作為生物的基礎(chǔ)實驗課，其實驗的理論和方法對現(xiàn)代生物科學(xué)的每個領(lǐng)域都有著重要的影響。特別是對于現(xiàn)代生命科學(xué)、食品科學(xué)和環(huán)境科學(xué)等都有極其重要的影響。因此，要想學(xué)生對生命科學(xué)基礎(chǔ)知識以及生命科學(xué)的發(fā)展動態(tài)有個系統(tǒng)的理解，就必須做好微生物學(xué)的研究教學(xué)工作。微生物學(xué)的教學(xué)關(guān)鍵還是實驗研究，然而一個實驗室的設(shè)備先進(jìn)與否，更是作為評定高?？蒲兴降闹匾w現(xiàn)。作為高等本科院校，高效的實驗室管理以及合理的實驗教學(xué)改革對學(xué)生創(chuàng)新能力的發(fā)展尤為重要。筆者就多年的教學(xué)經(jīng)驗以及近些年我校對于微生物學(xué)實驗教學(xué)的改革，和對實驗室的管理做出如下總結(jié)。
1 增強實驗室管理力度，提升教學(xué)質(zhì)量
我們都知道合理的管理章程可為提升教學(xué)成果，培養(yǎng)和提升學(xué)生自主動手及創(chuàng)新能力奠定良好的基礎(chǔ)。但是實驗室的所有程序是一個完整系統(tǒng)，必須從細(xì)節(jié)做起，才能達(dá)到服務(wù)于教學(xué)、有利于學(xué)生學(xué)習(xí)目的。
1.1 強化實驗室管理，更新健全各項管理制度
有條不紊的實驗室管理制度，才能創(chuàng)造安全有序的實驗環(huán)境，從而是實驗正常進(jìn)行。具體實施如下：安排特定人員管理實驗室，且制定除院辦公室有備用鑰匙外，和實驗管理人員配帶1把，其他人一律不得攜帶，從而確保了實驗室的設(shè)備安全。水災(zāi)、火災(zāi)的防控是實驗室管理的基本。高校微生物實驗室也建有“實驗室安全制度”和“實驗人員職責(zé)”等制度。便捷的常規(guī)管理不但縮減了工作量，而且還降低了工作難度，使效率在逐步提升中。我們要求學(xué)生使用試劑后及時放回原處，便于本組同學(xué)或下組同學(xué)使用。避免了學(xué)生使用后隨處亂放、不能及時清理的壞習(xí)慣，使得每次實驗都能夠井然有序的進(jìn)行。這樣不但確保實驗?zāi)芎翢o差錯地開展，而且加大了實驗室管理的安全性。
1.2 加強儀器管理，確保實驗正常進(jìn)行
顯微鏡無疑是最常用的實驗儀器，如果管理不當(dāng)會大大影響實驗的進(jìn)程。因此，在使用前要向?qū)W生多次強調(diào)務(wù)必要安全使用，其他儀器的使用也會同樣強調(diào)，效果非常明顯。為了便于檢修，我們將所有的實驗儀器都進(jìn)行了編號，并將各儀器配有使用登記本，要求使用者在使用后及時登記使用情況。然后將其掛在有相應(yīng)編號的顯微鏡上，并將顯微鏡放入相應(yīng)編號的儲藏柜中，這樣整個實驗室顯得特別整潔有序。學(xué)期結(jié)束前，我們對所有的顯微鏡實施徹底查看，將需要修理的進(jìn)行統(tǒng)計，然后將結(jié)果提交到秘書辦公室，使其能夠即時得到修理，確保下學(xué)期實驗時顯微鏡能夠正常使用。
2 強化實驗教學(xué)改革，適應(yīng)形勢發(fā)展需要
2.1 建立完善的考核制度
以往的生物教學(xué)實驗檢測過于看重實驗報告上的最后結(jié)果，卻疏忽了在整個過程中培養(yǎng)學(xué)生們的實地動手能力。這種實驗導(dǎo)致學(xué)生們覺得只要在最后填寫的結(jié)論是對的就可以，根本不必實際操作，這種實驗不僅失去的本身的意義，還大大地扼殺了學(xué)生參加實驗的興趣。我們該如何應(yīng)對這種情況？為此我們對實驗核制度做了修改，將考核內(nèi)容更改為從熟記實驗報告―― 具體操作―― 真實做出實驗報告。通過此次實驗制度的完善相信大幅度提高了學(xué)生的實驗積極性。
2.2 加強課堂整體連貫性
生物實驗課是在每學(xué)年的第一學(xué)期開課，為了使每個實驗達(dá)到預(yù)期效果。在基礎(chǔ)技能培訓(xùn)中，我們將實驗步驟按順序分為：基礎(chǔ)實驗、微生物的形態(tài)觀察實驗、微生物數(shù)量的鑒定、細(xì)胞大小鑒定和微生物生理生化指標(biāo)的測定。培養(yǎng)基的制備及高壓滅菌實驗，該實驗中制備的大量培養(yǎng)基可以供后續(xù)實驗使用。通過整個過程，器皿和儀器的使用方法將深入學(xué)生大腦，以及是學(xué)生對實驗基本理論得到進(jìn)一步的了解，可在原理上更進(jìn)一步理解每一步驟的含義，在操作上不斷領(lǐng)會每個細(xì)節(jié)的注意事項，這樣熟練整個操作過程，養(yǎng)成較好的實驗操作習(xí)性，為以后的深入研究墊下結(jié)實的基礎(chǔ)。
2.3 讓學(xué)生自主實施實驗
為了鍛煉學(xué)生實驗的基本功，強化學(xué)生實驗動手能力，需要對《微生物學(xué)》課程實驗進(jìn)行優(yōu)化。驗證性實驗，學(xué)生只能學(xué)到很多底層的操作技能，卻無法將所學(xué)內(nèi)容與實踐相聯(lián)系起來。讓學(xué)生領(lǐng)悟課堂上所學(xué)的實驗技能，去進(jìn)一步制定出新的方案，將不同的實驗技能做到綜合運用。這不光讓學(xué)生掌握了實驗理念，更鞏固了實驗技術(shù)，而且還提升了學(xué)生的積極自主操作技能。
傳統(tǒng)理念中，實驗前期準(zhǔn)備都是由教師們進(jìn)行，學(xué)生完全是被動學(xué)習(xí)知識，實驗課時他們只需要按照實驗步驟做下去即可。為了改變這一局面，學(xué)生都是自己著手準(zhǔn)備實驗，自己動手的學(xué)生不但鞏固了實驗課所學(xué)內(nèi)容，他們的自主動手能力也得到了大大的進(jìn)步，明顯高于其他同學(xué)，保證了整節(jié)課的順利進(jìn)行。學(xué)生參與準(zhǔn)備不但減輕了實驗老師的準(zhǔn)備工作量，還使學(xué)生親身體驗了準(zhǔn)備實驗的煩瑣和辛苦，為他們以后做其它方面的實驗和畢業(yè)設(shè)計奠定了扎實的地基。
3 結(jié)語
總之，一節(jié)實驗課成功的進(jìn)行和良好的實驗室管理是密不可分的。近幾年，通過我們堅持不懈地強化實驗室的管理與工作方法的改革，收效非常明顯。學(xué)生不但對微生物學(xué)這門看似枯燥無味的學(xué)科有了濃厚的學(xué)習(xí)興趣，而且進(jìn)一步調(diào)動了教師們對微生物學(xué)理論教學(xué)和實驗教學(xué)的積極性。只要不斷強化自己，勇于創(chuàng)新，堅持將實驗理念和實踐相結(jié)合的原則，消除學(xué)生的散漫氣氛，實驗教學(xué)的質(zhì)量必定還逐漸得到升級，教學(xué)改革也將推向縱深。
參考文獻(xiàn)
